五一节后的第一周彻底被细胞折腾崩溃了。细胞状态越来越差哪怕换成新复苏的细胞种子甚至从隔壁实验室借了一瓶新的培养基结果依然没有好转。经过仔细讨论和反复实验后才发现是细胞因子出现了问题。更准确地说是细胞因子内毒素含量超标了。为什么内毒素会伤害细胞呢内毒素Endotoxin是革兰阴性菌外膜中独特的结构成分主要成分是脂多糖LipopolysaccharideLPS。内毒素是维持细菌正常结构的主要成分但是会在菌体裂解、自溶或死亡后会大量释放。因此科研试剂在生产制备过程中不可避免的会带有内毒素。内毒素会造成细胞形态发生明显变化如体积缩小、折光率降低等还抑制细胞的增殖。内毒素的磷酸基团能与细胞膜上的蛋白质反应改变细胞膜形态导致细胞功能障碍。研究发现极低浓度的内毒素也会干扰细胞正常生长。Schwarz H等人发现0.02-2 ng/mL的脂多糖可激活细胞的免疫反应且不同细胞对内毒素的敏感度不一样。如THP-1细胞在受到最高浓度LPS2 ng/mL刺激时仅IL-8表达量显著增加而在相同浓度下moDCs会大量分泌IL-6、IL-8、IL-12和TNF-α。人单核细胞和CD1c DCs对内毒素更敏感0.2 ng/mL的LPS能够诱导以上所有细胞因子的释放。图1. 低浓度LPS对不同人类免疫细胞细胞因子产生的影响如何避免内毒素污染呢义翘神州给出了全新的解决方案。其位于德克萨斯州的生物工程中心C4B采用先进的技术工艺和设备生产ProPure™超低内毒素蛋白将其内毒素水平水平控制在0.05 EU/mg以下部分产品甚至达到0.01 EU/mg比行业标准的低了10倍以上为细胞培养提供更可靠的选择。义翘神州如何实现超低内毒素呢义翘神州在蛋白生产过程中通过以下工艺升级确保蛋白的超低内毒素水平·源头预防从质粒构建到缓冲液配制我们采用严格的质量控制体系使用无内毒素质粒和缓冲液、低内毒素吸附塑料容器并遵循常规在位清洗CIP原则。·环境隔离我们的美国生物工程中心C4B在设计之初就确立了“零大肠杆菌”的原则不使用大肠杆菌表达系统且不引入任何大肠杆菌或内毒素从物理空间上彻底切断污染路径。·双重检测我们采用LAL鲎试剂法和rFc重组C因子法方法检测内毒素浓度严格监控内毒素水平确保每一批次数据可追溯、可信赖。基于这套严密的“预防-隔离-检测”三重控制体系义翘神州能够将内毒素风险降至检测限值为药物开发和临床前研究提供定制化的超低内毒素蛋白产品和服务满足严苛的质量要求。参考文献1.Schwarz H, et al. Residual Endotoxin Contaminations in Recombinant Proteins Are Sufficient to Activate Human CD1c Dendritic Cells. PLoS ONE. 2014. doi:10.1371/journal.pone.01138402.Xuefang Liu, et al. LPS-induced proinflammatory cytokine expression in human airway epithelial cells and macrophages via NF-κB, STAT3 or AP-1 activation. Mol Med Rep. 2018. doi: 10.3892/mmr.2018.8542